胎鼠海馬神經(jīng)元的原代培養(yǎng)

一、背景
      海馬是大腦顳葉內(nèi)側(cè)的一個(gè)解剖結(jié)構(gòu)，因?yàn)樾螤铑?lèi)似海馬稱(chēng)為海馬體。海馬體的主要組成基本單位是神經(jīng)元，海馬神經(jīng)元的生理功能與人的記憶密切相關(guān)。一些疾病會(huì)使海馬神經(jīng)元出現(xiàn)損傷，比如常見(jiàn)的阿爾茲海默病、單純皰疹病毒性腦炎、自身免疫性腦炎等等，如果這些疾病出現(xiàn)，就會(huì)導(dǎo)致記憶障礙，甚至癡呆的表現(xiàn)。
      神經(jīng)細(xì)胞是近代神經(jīng)學(xué)科中研究重點(diǎn)之一，神經(jīng)細(xì)胞體外培養(yǎng)是指在體外模擬建立體內(nèi)生長(zhǎng)條件，使神經(jīng)細(xì)胞或神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞在其生存和生長(zhǎng)并維持其形態(tài)和功能的方法。神經(jīng)細(xì)胞體外培養(yǎng)技術(shù)已成為當(dāng)今神經(jīng)科學(xué)研究中的主要方法之一，與各種先進(jìn)的技術(shù)結(jié)合在一起滲透到各個(gè)學(xué)科，但因神經(jīng)細(xì)胞對(duì)體外培養(yǎng)條件要求條件較高難度大而又制約它的發(fā)展。

二、實(shí)驗(yàn)步驟
1.無(wú)菌條件下，從懷孕18天的SD大鼠腹中取出胎鼠，放在預(yù)冷的無(wú)鈣、鎂的HBSS平衡鹽溶液中；                          
2.解剖顯微鏡下，看清海馬結(jié)構(gòu)，剝?nèi)ズｑR上面的腦膜和血管；
3.加入0.05%胰酶-EDTA 消化液后放入 37℃孵箱內(nèi)消化15分鐘，每5分鐘搖晃一次；
4.HBSS溶液洗三次；
5.在HBSS溶液中吹打10次左右，吹打過(guò)程中不能有氣泡；
6.所收集的上清過(guò)濾后，將細(xì)胞懸液于4℃1000rpm離心10min ，棄上清，管內(nèi)加入種植液1重懸；
7.臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)，以 3 x 104cells/孔種入包被的24孔板，37℃，5%CO2，95%飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。4-6小時(shí)后，全量換種植液2；
8.每周換液兩次，每次半量換液。